微信在线咨询
哺乳动物过表达载体主要有非病毒和病毒两大类。非病毒类载体主要是pcDNA系列,如pcDNA3.0,pcDNA3.1,pcDNA4.0,pcDNA4.1等,病毒类载体包括慢病毒、腺病毒、腺相关病毒载体。对于体外细胞转染实验,最常用的载体是pcDNA和慢病毒载体。
1.关于载体的选择
1.1二者均可瞬转,但后期如果考虑筛选稳转细胞株,首选慢病毒载体,可用于包装慢病毒。
1.2插入外源目的基因片段大小方面,pcDNA(< 5-8kb)比慢病毒载体(<4.5kb)更大。
2.关于目的基因转录本的选择
参考资料中心:基因转录本选择
3.关于真核抗性的选择
| 真核抗性 | 筛选周期 | 工作浓度 |
| 嘌呤霉素/Puromycin | 1-4 days | 1-10 μg/mL |
| 潮霉素B/Hygromycin B | 5-7 days | 50-500 μg/mL |
| 杀稻瘟菌素/Blasticidin | Within 1 week | 2-10 μg/mL |
| 遗传霉素/G418 | 7-14 days | 100-800 μg/mL |
4.关于荧光蛋白的选择(是否需要带荧光蛋白,是否跟目的蛋白在C端或N端融合表达)
| 荧光类型 | 荧光蛋白种类 |
| 绿色 | EGFP、zsGreen |
| 红色 | RFP、mcherry |
| 黄色 | YFP |
5.关于标签蛋白的选择(是否需要带标签蛋白,是否跟目的蛋白在C端或N端融合表达)
His、flag、Myc等