1，引物的纯化方式及应用

该引物为RPA纯化的DNA单链，可满足常规PCR、染料法qPCR、一代测序、NGS、基因合成和基因亚克隆等下游实验应用。

2，引物合成单位

OD 单位：指在 1ml 体积 1cm 光程标准比色皿中，260 nm 波长下吸光度为 1 的 Oligo 溶液定义为 1OD₂₆₀ 单位。对于常规单链 DNA，1OD≈33 µg。 

nmol 单位：摩尔是表示物质的量的单位，每摩引物含有阿伏加德罗常数个物质。1 摩尔等于 10 的 9 次 方纳摩尔。 

OD 与 nmol 转换关系：nmol/OD=106 / 摩尔消光系数，对于长度 20 mer 的引物，1OD≈5 nmol。

MW= (A × 313.209) + (C × 289.184) + (G × 329.208) + (T × 304.196) - 61.964  ACGT代表各自核苷酸残基的数量

3，引物的保存

液体（TE buffer）：-20℃, >1年;  4℃,>1个月。干粉：-20℃, >2年;  4℃,>6个月。

建议将储存液（100 μM）小量多管储存于-20°C 即取即用。如短期内使用，也可稀释成工作液（10 μM）临时保存于 4°C。

4，引物的参数

4.1长度，指寡核苷酸链中单核苷酸残基的数量，如果修饰基团属于单核苷酸残基类似物，则也算做在内。（比如序列为 ATATTCGTAC，其长度为10mer，mer 是 Monomerie Μnit 的缩写，也有使用 nt 或 base 为单位的。 

4.2GC含量，寡核苷酸链中鸟嘌呤（G）和胞嘧啶（C）核苷酸的摩尔百分比。（比如10 mer 的引物链含有 3 个 G 和 C， 因此其 GC 含量为 30%。） 

4.3Tm值， 熔解温度（Melting Temperatμre, Tm）是指体系中有 50%的引物与其模板互补配对时的温度。

5，引物序列的获取

5.1 数据库调取：primerbank官网：https://pga.mgh.harvard.edu/primerbank/

5.2文献中调取: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/?term=primer++human+il6+&filter=datesearch.y_5

5.3引物合成公司免费设计

引物一般储存液（100 μM）和工作液（10 μM），按储存液配制。

1，离心干粉：将引物离心管按4,000 rpm，30~60 s 离心。

2，溶解干粉：推荐使用 TE Buffer，或超纯水。将1OD引物管中加入大约500ul, 收到引物时管子会标注加入溶液的量。

3，混匀：重新盖上盖，放置于旋涡震荡仪上充分混匀。

4，保存：暂时不用或长期储存请放入-20°C 冷冻，并做适当分装以减少冻融次数。