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本产品是使用SYBR GreenI 嵌合荧光法进行qPCR的专用试剂。核心组分是基于抗体法制备的热启动DNA聚合酶, 配合针对q PCR优化的反应缓冲液, 可以有效抑制非特异性扩增, 显著提高扩增效率, 从而对靶基因进行准确定量。同时,使用UDG酶和dUTP有效防止PCR产物的交叉污染,数据更准确。本产品中含有特殊的ROX Reference Dye,适用于所有qPCR仪器,无需在不同的仪器上调整ROX的浓度,只需在配制反应体系时加入引物、模板和水即可进行反应。
使用抗体法制备的热启动酶,提高灵敏度,增强特异性
针对qPCR优化的反应缓冲液,增强特异性,减少引物二聚体形成,提高扩增效率,重复性好, 可信度高
使用dUTP和UDG酶,可有效排除先前扩增产物的交叉污染,数据更准确
含有特殊的ROX Reference Dye,适用于所有qPCR仪器
PCR反应体系
Component | Volume (ul) | Volume (ul) |
2xSD qPCR Mix | 25 | 10 |
前引物(10 μM) | 1 | 0.5 |
后引物(10 μM) | 1 | 0.5 |
模板 | 1* | 1* |
ddH2O | 补到50ul | 补到20ul |
注:*基因组DNA加入10-100ng,cDNA作为模板加入1-10ng当量模板。
PCR反应程序
三步法:
94℃,20S¹
94℃,10S²
50-60℃,10S 40 cycles 注:三步法适用于引物Tm值小于55℃
72℃,10S
两步法:
94℃,20S¹
94℃,10S 40 cycles 注:两步法适用于引物Tm值大于55℃
60℃,20S²
注: 绝大多数情况下94℃可以打开模板双链并被快速热启动SD Taq DNA POlymerase扩增,但扩增区域为高GC含量区域时,应该将变性时间延长到20S。