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免冰浴快速转膜液是一种用于Western Blot湿转法的优化型转膜缓冲液。其核心优势在于通过全新配方大幅降低转膜过程中的产热,无需冰浴即可在室温下完成高效转膜,同时用无水乙醇替代有毒甲醇,提升操作安全性。
传统转膜液需提前预冷并全程冰浴,转膜耗时通常为1–3小时;本产品可将转膜时间缩短至15–40分钟,产热量显著减少,转膜效果与传统缓冲液一致或更优。适用场景:仅限湿转法,不适用于半干转。
使用方法
1.1×工作液配制(以配制1L为例)
1.1取一袋干粉倒入洁净量筒,加入约600–700mL去离子水或蒸馏水,搅拌溶解。
1.2加入200mL无水乙醇(若用95%乙醇,加入约210mL)。
1.3用去离子水定容至1000mL,充分混匀。无需调节pH。
2.转膜条件参考
推荐采用恒流400mA进行转膜,具体时间取决于蛋白分子量和凝胶浓度
蛋白分子量 | 推荐转膜时间(1.0mm胶) | 推荐转膜时间(1.5mm胶) |
<40kDa | 约15–25min | 约20–30min |
40–150kDa | 约30–35min | 约35–40min |
150–250kDa | 约45–60min | 约50–65min |
3.操作要点
3.1 PVDF膜:使用前需用无水甲醇浸润30秒以上,使膜呈均一半透明状。
3.2 NC膜:无需甲醇活化。
3.3 三明治组装:海绵垫→滤纸→凝胶→膜→滤纸→海绵垫,每层用滚轮赶出气泡。
注意事项
1.温度控制:虽然无需冰浴,但当环境温度>28℃或转膜时间>45分钟时,建议辅助冰袋降温,以防蛋白降解。
2.电源匹配:部分电源在恒流400mA时可能因功率不足触发过载保护,需适当调低电流或更换大功率电源。
3.回收使用:转膜液可回收使用1–2次,不建议更多次数重复使用。
4.判断:若溶液颜色变为浅棕色或黄褐色,或出现较多滤纸悬浮物,应丢弃。
5.乙醇纯度:建议使用分析纯或更高纯度的无水乙醇。
6.安全防护:穿实验服并佩戴一次性手套操作。