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蛋白质磷酸化可以动态调节蛋白质的功能、定位和相互作用，介导众多细胞过程。为了检测和表征磷酸化状态，需要保护样品在样品制备过程中免受内源性磷酸酶的影响。内源性磷酸酶的种类有很多，最佳方法是加入这些酶的抑制剂。磷酸酶抑制剂混合物由两管共8种不同的抑制剂组成（具体见下表的配方）：管1，三种天然化合物的组合，溶于DMSO；管2，五种无机盐的组合，溶于水溶液。这种混合物使研究人员能够在细胞裂解和样品处理过程中保持磷酸化的完整性，以进行下游生化分析，包括免疫印迹(WB)、免疫沉淀(IP)、激酶活性分析和质谱分析。
磷酸酶抑制剂配方及作用
管号 | 组分 | 浓度(100×) | 靶点 |
Phosphatase Inhibitor Cocktail 1 (100X in DMSO) | Cantharidin斑蝥素 | 500uM | 丝氨酸/苏氨酸磷酸酶Ser/Thr phosphatases :蛋白磷酸酶2A(PP2A) |
Bromotetramisole溴四咪唑 | 2.5mM | 碱性磷酸酶Alkaline phosphatases | |
Microcystin LR 微囊藻毒素LR | 500nM | 丝氨酸/苏氨酸磷酸酶Ser/Thr Phosphatases: 蛋白磷酸酶PP1/PP2A | |
Phosphatase Inhibitor Cocktail 2 (100X in ddH2O) | Sodium Orthovanadate 钒酸钠 | 100mM | 碱性磷酸酶（AP）, 蛋白酪氨酸磷酸酶（PTPs） |
Sodium molybdate 钼酸钠 | 115mM | 酸性和磷蛋白磷酸酶Acid and phosphoprotein phosphatases | |
Sodium tartrate 酒石酸钠 | 400mM | 酸性磷酸酶 Acid phosphatases | |
Imidazole 咪唑 | 200mM | 碱性磷酸酶Alkaline phosphatases | |
sodium fluoride 氟化钠 | 100mM | 酸性磷酸酶 Acid phosphatases |
操作流程
按照1:99比例,先向裂解液中加入Phosphatase Inhibitor Cocktail 1 混匀后，再加入Phosphatase Inhibitor Cocktail 2 混匀。（本产品和裂解液使用前混合，混合后不宜长期保存，禁止先将A、B管试剂预混后一次性加入）。使其在抽提试剂中成1×工作液。
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