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在平衡状态下内源性蛋白质产生并降解,因此在稳定的环境条件下其细胞水平是稳定的。粗细胞提取物含有许多能够降解提取物中的蛋白质的内源酶,例如磷酸酶和蛋白酶。当在体外从细胞和组织中提取蛋白质时,蛋白质产生被显著抑制,降解增加。提高完整蛋白质产量的最佳方法是加入已知存在的那些酶的抑制剂。
Protease Inhibitor Cocktail (100x)相对于PMSF更稳定,更通用和更广泛。针对动物、植物、细菌、酵母、真菌样品中的丝氨酸蛋白酶,半胱氨酸蛋白酶及金属蛋白酶等各种蛋白酶均可以抑制。
本品可用于蛋白质免疫分析 (WB)、免疫沉淀 (IP)、免疫共沉淀 (Co-IP)、pull-down、免疫组织化学 (IHC)、免疫荧光 (IF)、激酶研究等多种分析。
蛋白酶抑制剂cocktail组分及作用
| 组分 | 浓度 | 作用 |
| Aprotinin | 80uM | 丝氨酸蛋白酶的竞争性可逆抑制剂 |
| Bestatin | 4mM | 氨基肽酶可逆抑制剂 |
| E-64 | 1.4mM | 半胱氨酸蛋白酶不可逆抑制剂 |
| Leupeptin | 2mM | 丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶可逆抑制剂 |
| Pepstatin A | 1.5mM | 天冬氨酸蛋白酶抑制剂 |
| AEBSF.HCl | 104mM | 水溶性的丝氨酸蛋白酶不可逆抑制剂,其抑制常数与PMSF和DFP的抑制常数相似,可以有效抑制胰蛋白酶(trypsin)、糜蛋白酶(chymotrypsin)、纤溶酶(plasmin)、激肽释放酶(kallikrein)和凝血酶(thrombin)等蛋白酶,作为PMSF和DFP的替代物,AEBSF的毒性更低、水溶性和水溶液稳定性更好。 |
操作流程
按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail(例如990μl抽提试剂中加入10μl Protease Inhibitor Cocktail),使其在抽提试剂中成 1×工作液。
操作流程
取出实验所需蛋白抽提试剂进行预冷,按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail(例如990μl抽提试剂中加入10μl Protease Inhibitor Cocktail),使其在抽提试剂中成 1×工作液。
注意事项
1.蛋白酶抑制剂严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤,吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。
2.操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。