植物 RIPA 裂解液(强)(Plant RIPA Lysis Buffer(Strong))是一种常用的植物细胞组织或原生质体快速裂解液。该产品的主要成分为 1% Triton X-100 、1% sodium deoxycholate(脱氧胆酸钠)和 0.1% SDS等去垢剂以及 sodium orthovanadate(钒酸钠)、sodium fluoride(氟化钠)、EDTA 和 leupeptin(亮肽素)等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白质 的降解。植物 RIPA 裂解液(强)裂解得到的蛋白样品可以用于常规的 PAGE、蛋白质免疫印迹(WB)、免疫沉淀(IP)等。

操作流程

1.植物细胞样品

(1)溶解植物RIPA裂解液(强)，混匀。取适当量的裂解液，加入适当的蛋白酶抑制剂Cocktail（货号：SDP0003），磷酸酶抑制剂Cocktai（货号：SDP0004)，终浓度为1x。

(2)离心收集植物细胞，按照每50-100万细胞加入100-200uL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触，在冰上裂解2-10min。

(3)充分裂解后， 10000-14000g离心3-5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、WB和IP等操作。

2.植物原生质体样本：

(1)把组织剪切成细小的碎片，制备原生质体。

(2)质粒转化原生质体，继续培养16-48h，根据需要采取合适的实验条件进行处理(可选)。

(3)100-500g低速离心收集原生质体。

(4)融解植物RIPA裂解液(强)，混匀。取适当量的裂解液，加入适当的蛋白酶抑制剂Cocktail（货号：SDP0003），磷酸酶抑制剂Cocktai（货号：SDP0004)，终浓度为1x。

(5)按照每50-100万原生质体加入100-200uL裂解液的比例加入裂解液。轻轻弹管底使细胞充分裂解， 充分裂解后应没有明显的原生质体沉淀。如果原生质体量较多，需分装成每管50-100万原生质体，然后再裂解。大团的50-100万原生质体较难裂解充分，而少量的50-100万原生质体由于裂解液易和50-100万原生质体充分接触，较容易裂解充分。

3.植物组织样品

(1)把植物组织剪切成细小的碎片。

(2)融解植物RIPA裂解液(强)，混匀。取适当量的裂解液， 在使用前加入适当的蛋白酶抑制剂Cocktail（货号：SDP0003），磷酸酶抑制剂Cocktai（货号：SDP0004)，终浓度为1x。

(3)按照每20 mg植物组织加入100-200uL裂解液的比例加入裂解液。(若裂解不充分可适当增加裂解液用量，如果需要高浓度蛋白样品，可适当减少裂解液的用量。 )

(4)用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。或把组织样品冷冻后液氮研磨， 研磨充分后加入裂解液进行裂解。

(5)充分裂解后，10000-14000g离心3-5min，取上清，即可进行后续的PAGE、WB和IP等操作。

注意事项

(1)如果植物组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈涡旋使样品裂解充分。然后同样离心取上清， 用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便， 不必使用匀浆器或研磨设备， 缺点是不如匀浆或研磨那样裂解比较充分。

(2)植物RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物，是正常现象。在不检测和基因组DNA紧密结合的蛋白情况下，可以直接离心取上清用于后续实验； 如果需要检测和基因组紧密结合的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，即可检测到这些转录因子。

(3)为取得最佳的使用效果，建议适当分装后使用尽量避免反复冻融。

(4)裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。