RIPA Lysis Buffer(Strong)是广泛用于报告基因检测、蛋白质激酶实验、免疫测定和蛋白质纯化的裂解液和洗涤缓冲液。RIPA Lysis Buffer (Strong)的主要成分为50 mMTris(pH7.4)、150 mM NaCl、1％TritonX-100 、1％sodium deoxycholate、0.1％SDS和一般的蛋白酶和磷酸酶抑制剂(如sodium orthovanadate，sodium fluoride和EDTA)，可有效抑制蛋白质的降解。

该产品适用于细菌、真菌、动物和植物的细胞或组织样品，使用该产品得到的蛋白样品可用于常规的蛋白质印迹(Western blotting，WB)、免疫沉淀(Immunoprecipitation，IP)、免疫共沉淀(Coimmunoprecipitation，Co-IP)和酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA)等实验。

1. 裂解细胞样本

(1) 溶解 RIPA Lysis Buffer (Strong)，混匀。取适量的裂解液，根据实验要求加入适量的蛋白酶磷酸酶抑制剂等混合物，置于冰上备用。

(a) 贴壁细胞  除去培养液，用预冷的 PBS、生理盐水或无血清培养液洗2遍(洗去血清中的IgG有助于IP和Co-IP
实验的顺利进行，但对于WB实验并非必要, 如果血清中的蛋白质对后续实验没有干扰，可以不洗) 。
按照 6 孔板每孔加入 150-250uL 裂解液的比例加入预冷的裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。冰上放置 5-10 min，期间剧烈震荡 3-4 次， 每次 30 秒，以充分裂解。一般裂解液接触动物细胞
1-2s 后细胞就会被裂解，植物细胞宜在冰上裂解 2-10min。  

(b) 悬浮细胞  离心收集细胞，弃上清，用预冷的PBS、生理盐水或无血清培养液洗 2 遍(洗去血清中的 IgG 有助于 IP
和 Co-IP 实验的顺利进行，但对于WB实验并非必要，如果血清中的蛋白质对后续实验没有干扰，可
以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250uL 裂解液的比例加入预冷的裂解液。轻轻弹击管底使细胞充分
裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。若细胞数量较多，需分装成 50-500万细胞/管，之后再进行裂
解。冰上放置5-10min，期间剧烈震荡 3-4 次，每次 30s，以充分裂解。
注意： 一般每50-500万细胞可用1mL的RIPA裂解液裂解。细胞数量较高时,可加大裂解液用量。

(c) 细菌或酵母  以1mL菌液或酵母为例，离心去上清，轻轻涡旋或弹击管底使细菌或酵母尽量分散。加入100-200uL
裂解液， 轻轻混匀，冰上裂解 2-10min。分别使用溶菌酶和破壁酶消化细菌和酵母，再使用本裂解液
进行裂解，可获得更好的裂解效果。 

(2) 充分裂解后， 14,000g 低温离心5min，取上清，即可进行后续的WB、IP和PAGE等操作。也可用液氮速冻后于-80℃长期保存。 

2. 裂解组织样品 

(1) 溶解 RIPA Lysis Buffer (Strong)，混匀。取适量的裂解液,根据实验要求加入适量的蛋白酶磷酸酶抑制剂等混合物， 置于冰上备用。 

(2) 将组织置于小皿中，冰上操作， 剪切成细小的碎片。 

(3) 按照每20mg组织加入150-250uL 裂解液的比例加入裂解液。 (如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液， 如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。) 

(4) 用玻璃匀浆器匀浆或超声破碎细胞，直至充分裂解。匀浆或超声破碎细胞后应镜检，细胞破碎率不小于90%，同时组织已经完全裂解， 没有明显的小组织块。也可以把组织样品冷冻后进行液氮研磨，
研磨充分后加入裂解液进行裂解。 

(5) 将匀浆物转移到离心管，冰上放置5-10min，期间剧烈震荡3-4次，每次30s，以充分裂解。 

(6) 充分裂解后，14,000g低温离心5min，取上清，即可进行后续的WB、IP和PAGE等操作。