QIAGEN One-Step Ahead RT-PCR Kit中含有Sensiscript和Omniscript两种不同的逆转录酶，以及平衡配比的Taq DNA聚合酶和具有校对功能的高保真酶。

在逆转录步骤，Omniscript和Sensiscript逆转录酶上结合有逆转录阻断基团，使其处于非激活状态，不会在室温条件下生成非特异的转录产物。当温度升高至50°C时，阻断基团从逆转录酶上解离，逆转录酶迅速达到完全激活状态。宽泛的RNA模板量范围（0.1 pg – 2 µg）。

PCR扩增步骤受三种经平衡配比的DNA聚合酶催化。在室温下，QuantiNova DNA Polymerase处于抗体介导的阻断酶活状态。它在95ºC孵育5分钟后即可恢复活性，在第一个热循环即可实现高度特异性的扩增。HotStarTaq DNA Polymerase的酶活性逐渐提高，确保PCR的高产量。具有校对功能的高保真DNA聚合酶具有3'→5'外切酶活性，同样是95ºC孵育5分钟活化，确保扩增的高度准确性和持续合成能力。

预混液中含有新型双阳离子PCR buffer，确保在宽泛的退火温度范围内，都可生成高特异性PCR产物。

Q-Solution，有助于对于富含GC或含有复杂二级结构的模板进行高效的逆转录和扩增。