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用福尔马林固定的组织导致RNA-RNA和RNA-蛋白质交联,从而影响了RNA在下游应用中的表现。miRNeasy FFPE Kit提供了独特的裂解和孵育条件,可逆转福尔马林对RNA造成的交联。特别研制的的裂解缓冲液有效地将RNA从组织切片中释放出来,同时避免了RNA的进一步降解。
miRNeasy FFPE Kit操作流程都可在85分钟之内完成。将福尔马林固定、石蜡包埋(FFPE)的至少1张切片(厚度5-20µm)进行脱蜡(脱蜡液需单独购买,cat:19093)后,蛋白质酶K消化裂解,并在80°C下孵育样本15分钟逆转福尔马林交联。然后,在优化的DNase消化步骤中,用DNase Booster Buffer快速去除基因组DNA,并且用RNeasy MinElute柱纯化浓缩,洗脱体积仅有14–30 µl,得到高纯度高浓度的(含miRNA)总RNA。
