内毒素，又称脂多糖或LPS，是大肠杆菌等革兰氏阴性菌细胞膜的组成部分，内毒素在质粒裂解纯化过程中释放出来，并显著降低内毒素敏感细胞株的转染效率。此外，内毒素与DNA竞争结合转染试剂，影响转染实验中质粒DNA的摄取。内毒素也诱导巨噬细胞和B细胞等免疫细胞发生非特异性免疫反应，从而导致转染结果的误读。这些反应包括诱导的蛋白质和脂类，如IL-1和前列腺素等的合成。总体而言，内毒素在转染实验中是不可控变量，影响结果的可重复性，使它们难以对比、解读。在基因治疗研究中，内毒素可造成内毒素休克综合症和激活补体级联，干扰研究。

EndoFree Plasmid Mega Kit 收集500-2500ml菌液中的菌体，碱裂解后细菌裂解物放入QIAfilter Cartridge中，过滤澄清，将Endotoxin Removal Buffer加入到过滤后的裂解液中，冰浴后，经预装的QIAGEN-tips依靠重力流流出，确保不会流干，减少了质粒制备的手工操作时间。在适当的低盐缓存液和pH下选择性结合质粒DNA，通过中盐洗涤除去RNA、蛋白质、代谢物和其他低分子量杂质，并在高盐缓冲液中洗脱纯质粒DNA。洗脱所得DNA经异丙醇沉淀浓缩和脱盐，乙醇再次漂洗后，离心收集高纯度高浓度（>1000ng/ul）的真正无内毒素（<0.1EU/ug）质粒DNA，产量可达到2.5mg。下游可用于转染，包括原代、敏感以及悬浮细胞；基因治疗、基因沉默、显微注射等。

QIAGEN-tips中独特的阴离子交换树脂专为核酸纯化而开发。

1）高纯：卓越的分离特性使DNA纯度等于或优于连续两轮CsCl梯度离心获得的DNA纯度。

2）真正的无内毒素：阴离子树脂技术+Endotoxin Removal Buffer，相当于2次去内毒素的效果，真正实现无内毒素。

3）产量高：阴离子树脂的电荷密度远高于硅胶膜，与质粒的结合能力更强，反复过柱，可显著提高质粒DNA产量，性价比极高。

4）浓度高：异丙醇沉淀浓缩，质粒DNA达到1000ng/ul以上。

qiagen专利的LyseBlue试剂，确保最佳裂解和最大DNA产量

该试剂盒也包含LyseBlue指示剂，用于指示最佳的缓冲液混合状态。通过简单的颜色变化，就可避免常见的手动操作失误，防止细胞裂解不充分及SDS、基因组DNA和细胞碎片沉淀不完全。这种独特的缓冲液添加剂确保了细胞充分裂解和完全中和，使产量最大化。