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无蛋白快速封闭液是一种不含任何蛋白质成分的即用型封闭液,专为Western Blot、ELISA、IHC、IF等免疫实验设计。它通过合成高分子聚合物快速填充膜或固相载体表面的非特异性结合位点,从而降低背景、提高信噪比。整体封闭效果明显优于传统的基于BSA(牛血清白蛋白)、脱脂奶粉、酪蛋白(Casein)等的封闭液,也可以用于一抗的稀释。
优点:
快速高效:封闭时间5-15min分钟即可,并且和BSA、脱脂奶粉、酪蛋白等传统封闭剂相比,特异性信号更强。
背景低:无蛋白配方避免了抗体与封闭剂中蛋白的交叉反应,确保了极高的信噪比。
兼容性好:本产品兼容辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(AP)和生物素标记的二抗;不含磷酸化蛋白和生物素,特别适合磷酸化特异性抗体及生物素检测系统。
使用便捷:本产品既可以做封闭液也可以是一抗的稀释液。
使用方法
1.Western Blot膜封闭
转膜完成后,用TBST或纯水简单漂洗膜。加入足量封闭液完全覆盖膜(推荐7.5×8cm膜使用10–20mL),室温摇床孵育5–20分钟即可。若抗体背景较高,可延长至30–60分钟。封闭后可直接进行一抗孵育,部分产品支持免洗操作。
2.其他应用
ELISA:每孔加入300μL,37℃孵育5分钟即可进行后续步骤。
IHC/IF:组织切片室温封闭30分钟,或作为溶剂溶解3% BSA使用
注意事项
1.适用性局限:没有任何一种封闭剂能适合所有抗体系统。若发现某抗体使用本产品效果不佳,应换用BSA或脱脂奶粉。
2.重复使用:推荐仅使用一次。对于信噪比高的内参抗体可重复使用2–3次,但回收液不可与未使用过的封闭液混合。
3.缓冲体系选择:检测磷酸化蛋白或使用AP标记物时,优先选择Tris缓冲体系(TBS)的封闭液,避免PBS中的磷酸基团干扰。
4.操作细节:产品具有一定黏度,移液时需慢吸慢放以保证体积准确。请穿实验服并戴手套操作。