胰蛋白酶（Trypsin）是一种丝氨酸水解酶，它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切段，水解细胞间的蛋白质，破坏细胞间的连接，从而使组织或贴壁细胞离散成单个细胞。胰酶分散细胞的活性与组织或细胞的特性、胰酶浓度、温度和作用时间有关，在pH8.0和37℃时，胰酶的作用能力最强。由于EDTA能够螯合Ca²⁺和Mg²⁺，从而破坏细胞连接促进细胞的解离，因此在胰酶溶液中常常会加入一定量的EDTA混合使用，以增强解离效果。

    胰酶细胞消化液（Trypsin-EDTA Solution）含0.25%胰酶（Trypsin）、0.02%EDTA和酚红，不含Ca2+和 Mg2+。该消化液已用 0.22 μm 滤膜过滤除菌，可以直接用于培养细胞的消化，或者一些组织的消化。本胰酶细胞消化液具有方便快速的特点，通常室温消化1分钟左右就可以消化下大多数贴壁细胞。

操作流程

贴壁细胞的消化：

1、吸去培养液，用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。

2、加入少量胰酶细胞消化液（含酚红），略盖过细胞即可，室温放置30秒至2分钟。不同的细胞消化时间有所不同。

3、显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化，或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来；此时吸除胰酶细胞消化液；加入含血清的完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。

4、如果发现消化不足，则加入胰酶细胞消化液重新消化。

5、如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。

组织的消化：

不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。

注意事项

1、在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。

2、胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差。