ECL Chemiluminescent Substrate Detection Kit (fg)可为使用辣根过氧化物酶(HRP)偶联物的免疫印迹实验提供明亮的信号，可通HRP实现低皮克级和飞克级(以HRP浓度为标准)的免疫印迹检测，其灵敏度，发光时间和背景均明显优于同款T公司和M公司。该ECL底物能够兼容各种膜、封闭液和宽范围抗体稀释液，以出色性能、通用性和高性价比，满足用户的免疫印迹应用需求。

产品特点：

• （1）用于辣根过氧化物酶(HRP)的增强型化学发光底物。

• （2）低皮克级灵敏度- 检测硝化纤维素膜或PVDF膜上低皮克级和飞克级(以HRP浓度为标准)的蛋白条带。

• （3）长信号持续时间- 在条件优化情况下，经底物孵育的印迹条带能够持续输出6至8小时的可检测光信号。

• （4）稳定试剂- 工作液在24小时内保持稳定；试剂盒在室温下可稳定放置长达1年。

操作流程

1.执行SDS-PAGE、转膜和Western Blot步骤(注意用HRP标记IgG或用一抗-链亲和素-生物素-HRP夹法。

2.Western Blot实验最后一次洗膜的同时配置新鲜的发光液混合物:分别取等体积A液和B液，放入干净的容器中混合(室温放置2小时内灵敏度未检出到显著变化，超过2小时会影响灵敏度)。

3.用镊子取出膜，搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥，将膜完全浸入发光液中(0.125ml发光液/1cm²膜),使其与发光液充分接触(可选用水平摇床使膜充分接触工作液)，室温孵育5min。

4.用塑料镊子夹起膜，搭在滤纸上沥干发光液(勿洗去发光液)。

5.打开X胶片暗盒，在暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜，将Western Blot膜贴在保鲜膜上并用保鲜膜折起来完全包事Western Blot膜，去除气泡和皱裙，可煎去边缘多余保鲜膜。

6.用滤纸吸去多余发光工作液，用胶带将覆盖Western Blot膜的保鲜膜固定在暗盒内，蛋白带面向上。

7.X胶片采集信号或使用电子成像设备采集信号。

注意事项

1.步骤1-6可在日光灯下操作，但是发光液暴露于强光下时间过久，灵敏度可能会略降低。

2.请带手套操作，以免在膜上留下印迹。

3.配置好的工作液应该2小时内使用，超过2小时可能会影响灵敏度:配置好的发光液成注意避强烈光，但是正常实验室灯光不会对工作液造成显著损伤。

4.工作液与膜混合不均匀会导致结果不均一，将工作液与膜充分接触混匀是获得稳定结果的关键。

5.长时间曝光或蛋白过量，将加深背景并使得条带强弱失去线性关系；曝光不足则使得条带模糊。

6.NaN3能抑制HRP活性，回收二抗时应该避免使用NaN3，如需使用勿超过0.01%。