微信在线咨询
牛血清白蛋白(第五组分),简称BSA-V或Cohn Fraction V,是牛血清中的一种球蛋白,呈白色至淡黄色粉末,包含约607个氨基酸残基,分子量约66kDa,等电点为4.7。BSA在生物化学与分子生物学实验中应用极为广泛,主要用途包括:作为免疫实验(WB、ELISA、IHC)的封闭剂以减少非特异性结合;作为载体蛋白增强弱抗原的免疫原性;作为酶反应稳定剂,防止酶的非特异性吸附与变性;以及作为蛋白定量检测的标准品。
使用方法
1.配制封闭液(Western Blot/ELISA)
使用TBST或PBS作为溶剂,建议工作浓度为1%–5%(w/v)。例如,配制3%的封闭液:称取3g BSA粉末,溶解于100mLTBST中,充分混匀。室温封闭60分钟即可,对于背景较高的抗体可尝试4℃过夜封闭。
2.配制抗体稀释液
同样使用TBST配制,常用浓度为1%–3%,用于稀释一抗或二抗。
3.其他用途
在限制性内切酶消化反应中,常按酶说明书要求加入终浓度为100μg/mL的BSA,以稳定酶活性。
注意事项
1.溶液保存:BSA溶液建议现配现用,不可长期保存。若需保存,应分装后冻存于-20℃,并避免反复冻融。
2.细胞实验:若用于细胞培养,溶解后须经0.22μm微孔滤膜过滤除菌,推荐使用对蛋白吸附较少的PVDF膜。
3.热稳定性:BSA遇热易凝固,加热至50℃或以上时会形成疏水性聚集体,无法通过冷却恢复,操作时应避免高温。
4.安全防护:请穿实验服并戴一次性手套操作。