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exoRNeasy kits使用膜亲和离心柱从大多数液体样本(包括尿液、血清、血浆、脑脊液和细胞培养上清液)中有效捕获外泌体和其他 EV。然后RNeasy MinElute离心柱从EV中分离RNA。exoRNeasy Midi Kit(cat:77144)可高效处理较小体积的样品(最多 1 ml 血清/血浆或 4 ml 尿液),而exoRNeasy Max Kit允许使用大体积样品(高达 4 ml 血清/血浆、16 ml 尿液或 32 ml 细胞培养上清液)以检测低丰度 RNA。exoRNeasy Serum/Plasma Starter Kit (20)(cat:77023)是中提和大提各10T。
exoRNeasy kits从细胞外囊泡中分离RNA的总程序包括两个阶段:外泌体纯化和RNA分离,仅需1小时完成,在外泌体纯化阶段,将预过滤样品(排除大于0.8μm的颗粒)与缓冲液XBP混合并结合到exoEasy膜亲和自旋柱上。结合的外泌体用缓冲液XWP洗涤,然后用QIAzol裂解。在RNA提取步骤中,将氯仿加入到QIAzol洗脱液中,并回收水相并与乙醇混合。总RNA,包括miRNA,与离心柱结合,在那里洗涤三次并洗脱。
要洗脱外泌体做鉴定,exoRNeasy kits不包含外泌体洗脱的Buffer XE (cat: 76214),请单独购买。另外由于尿液样本杂质较多,如果要提取尿液样本的miRNA,需单独购买Reagent UI (1 ml)(cat:77900)。
2019年cell(IF=66.85)文章( https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30951671/),通过对5种生物液体中的10种分离exRNA的方法系统比较,exoRNeasy可提高检测的可靠性和可重复性、简便性。
