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miRNeasy Tissue/Cells Advanced Mini Kit是经典的 miRNeasy Mini Kit (cat:217004)的升级版。改进版本将无需酚氯仿分相,且搭配gDNA去除柱,能够从动物组织(高达30mg)和细胞(高达10*7个)中纯化总RNA(包括小RNA≥18nt)。
miRNeasy Tissue/Cells Advanced Mini Kit将缓冲液RLT添加到组织或细胞样品中,然后进行彻底的破碎和均质化步骤来实现样品裂解(RLT含有硫氰酸胍,可完全裂解样本,同时可使RNA酶和其他蛋白完全变性,确保RNA的稳定),接下来,将缓冲液AL添加到裂解物中,以优化gDNA去除柱去除gDNA。将缓冲液RPP添加到过gDNA去除柱的溶液中,离心并沉淀抑制剂(主要是在组织和细胞样品中高度浓缩的蛋白质,可能会干扰RNA分离或下游分析)。将含有总RNA的上清液转移到新的反应管中,并加入异丙醇(为≥18ntRNA提供适当的结合条件)。然后将样品加到RNeasy Mini离心柱上,其中总RNA与膜结合,所有污染物都被有效地洗掉。高质量RNA,包括miRNA和其他小RNA,在少量无RNase的水中洗脱。
当样本含量较低时,动物组织(低于5mg)和细胞(低于1x10*6个),推荐使用miRNeasy Micro Kit (cat:217084)或者miRNeasy Tissue/Cells Advanced Micro Kit (cat:217684)。
