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当前传统组织学中的组织固定方法采用多聚甲醛/福尔马林的固定剂,与生物分子交联,修饰核酸和蛋白质。在组织固定、储存和处理过程中,交联导致核酸降解。因为无法完全去除交联,其引起的化学修饰将限制敏感的下游应用,如定量PCR或RT-PCR。为了实现对同一样本进行分子病理检测和传统病理检测,需要一种方法在稳定核酸的同时保持组织形态。
QIAGEN研制了PAXgene Tissue System以满足这些需求。该系统包括组织采集装置PAXgene Tissue Container(用于采集、稳定、储存及运输样本组织)以及用于纯化总RNA、DNA或miRNA、蛋白的试剂盒。
PAXgene Tissue Containers包含样本固定和核酸稳定2部分试剂:PAXgene Tissue FIX(50 ml)(cat:765312)可快速浸透并固定组织,保存组织形态。其固定效果与福尔马林固定相当,但不会损伤核酸,无核酸交联和降解。固定后,去除PAXgene Tissue FIX,并在同一容器中加入PAXgene Tissue STABILIZER(cat:765512)。样本中的核酸、蛋白质和样本的组织形态可在室温下稳定长达7天,在2–8°C稳定2-4周;–20°C或–80°C可稳定26个月以上。稳定的样本可包埋在石蜡中用于组织学研究。
PAXgene Tissue RNA/miRNA Kit从固定并稳定的组织样本中纯化核酸可在石蜡包埋之前或之后进行,在结合缓冲液、Buffer TM1中破碎并匀质化组织样品。离心之后去除细胞碎片,在裂解液中添加乙醇确保可结合所有18nt以上的RNA。然后将样品放至PAXgene RNA MinElute离心柱上,总RNA结合到膜上,污染物被有效洗脱。在两次洗涤步骤之间,用DNase I处理膜,去除少量结合的DNA。洗涤之后,用低盐洗脱液洗脱包含miRNA的RNA,并加热使RNA变性。