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关于外泌体的背景知识
外泌体是一种能被机体内大多数细胞分泌的具有脂质双分子层膜结构的微小囊泡。常规大小在30-150nm，大多数类型的细胞都可以分泌外泌体。外泌体也广泛存在于体液中，包括血液、脑脊液、眼泪、尿液、唾液、乳汁等，外泌体中富含核酸、蛋白、脂质等活性生物分子。外泌体频繁穿梭于细胞之间，为细胞之间的通信提供了桥梁。成为疾病标志物、疾病机理、生物材料、药物开发等研究的创新热点。 外泌体在免疫中抗原呈递、肿瘤的生长与迁移、组织损伤的修复等生理病理上起着重要的作用。不同来源的外泌体marker既有通用性（CD9、CD63、TSG101），又有细胞组织的特异性。
关于QIAGEN外泌体提取方法
沉淀法：1)适用于多种样本：尿液样本2-10mL，CSF样本1mL，细胞培养液 1-10mL ；血浆/血清0.2-1.4mL； 2）快而简单：2小时内完成外泌体提取，无需高速离心及酚/氯仿提取。
样本类型 | 产品名称 | 货号 | 规格 |
细胞上清、尿液、脑脊液 | miRCURY Exosome Cell/Urine/CSF Kit | 76743 | 100T*1mL;24T*5ml;12T*10ml |
血清血浆 | miRCURY Exosome Serum/Plasma Kit | 76603 | 16T*1.5ml; 50T*0.25ml |
亲合柱膜法：1)适用于多种样本：血浆血清、细胞培养上清及其他生物液体样本；2）超快：25分钟内纯化获得exosome及其他细胞外囊泡3）可处理多样本和大体积样本：离心柱纯化流程，可平行处理多个样品：4 ml血浆或血清，或32ml细胞培养上清（如需更大体积，需购买xbp buffer多次上样或用超滤管先浓缩）。
样本类型 | 名称 | 货号 | 规格 |
各种样本 | exoEasy Maxi Kit (20) | 76064 | 20T |
关于外泌体鉴定方法
1）粒径分析：纳米颗粒示踪分析——NTA（Nanoparticle Tracking Analysis）是国际细胞外囊泡学会（ISEV）和广大研究者认可的外泌体鉴定技术之一，可快速、稳定地进行外泌体的粒径与浓度和纯度的鉴定。该方法基于单一颗粒示踪技术并结合经典微电泳技术（Zeta电位）和布朗运动，利用Stockes-Einstein方程式计算出纳米颗粒的流体力学直径和浓度。
2）透射电镜鉴定：透射电子显微镜分析——TEM（Transmission Electron Microscope）分辨率为0.1-0.2nm，可对外泌体双层囊膜结构进行超微观察，通常呈现茶托型或一侧凹陷的半球形。TEM是把经加速和聚集的电子束投射到非常薄的样品上，电子与样品中的原子碰撞而改变方向，从而产生立体角散射。散射角的大小与样品的密度、厚度相关，因此可以形成明暗不同的影像，影像放大、聚焦后在成像器件(如荧光屏、胶片、感光耦合组件)上显示出来。
3）western blot检测：通过WB检测外泌体标志蛋白，对提取的外泌体纯度进行进一步鉴定。常见的如tetraspanins蛋白超家族（CD63、CD9、CD81和CD82）、热休克蛋白（heat shock protein 70，HSP70）和肿瘤易感基因101（tumor susceptibility gene 101，TSG101）等。
关于外泌体研究方向
根据外泌体富含蛋白质、脂质、RNA（miRNA最丰富）和DNA（包括线粒体DNA）等物质，qiagen在核酸方面可以提供的方案：
1）RNA提取及检测
严格类型 | 名称 | 货号 | 规格 |
从样本到RNA | exoRNeasy Midi Kit (50) | 77144 | 50T中提（0.1-1ml血清血浆） |
从样本到RNA | exoRNeasy Max Kit (50) | 77164 | 50T大提（1-4ml血清血浆或32ml细胞上清16ml尿液） |
从样本到RNA | exoRNeasy Serum/Plasma Starter Kit (20) | 77023 | 10T中提+10T大提 |
从外泌体到RNA | miRNeasy Micro Kit (50) | 217084 | 50T |
长链RNA检测（mRNA/lncRNA/circRNA） | QuantiTect Rev.Transcription Kit (50) | 205311 | 50T |
QuantiNova SYBR PCR Mix Kit (500) | 1129280 | 500T | |
miRNA检测 | miRCURY LNA miRNA PCR Starter Kit | 339320 | LNA修饰并验证miRNA引物:2*200T； 加尾法反转:64T*10uL；定量:200T*10uL |
miRNA pcr芯片 | Human CSF Exosome Focus, miRCURY LNA miRNA Focus PCR Panel | YAHS-124Y | qPCR检测人脑积液外泌体中87种miRNA |
Human Urine Exosome Focus, miRCURY LNA miRNA Focus PCR Panel | YAHS-123Y | qPCR检测人尿液外泌体中87种miRNA | |
Human Serum/Plasma Focus | 339325 | qPCR检测人血液中84（小鼠/大鼠）、179、372种miRNA |
2）DNA提取及检测
样本类型 | 名称 | 货号 | 规格 |
从外泌体到DNA | QIAamp DNA Micro Kit(50) | 56304 | 50T |
DNA MDA扩增放大至ug | REPLI-g Mini Kit (25) | 150023 | 25T |
定量检测 | QuantiNova SYBR PCR Mix Kit (500) | 1129280 | 500T |
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